Radioimmunoassay - Radioimmunoassay

Radioimmunoassay
Gittergewebe D011863

Ein Radioimmunoassay ( RIA ) ist ein Immunoassay , der radioaktiv markierte Moleküle bei der schrittweisen Bildung von Immunkomplexen verwendet . Eine RIA ist eine sehr empfindliche In-vitro- Testmethode zur Messung von Substanzkonzentrationen, bei der üblicherweise Antigenkonzentrationen (z. B. Hormonspiegel im Blut ) mithilfe von Antikörpern gemessen werden .

Obwohl die RIA-Technik äußerst empfindlich und äußerst spezifisch ist und spezielle Geräte erfordert, gehört sie nach wie vor zu den kostengünstigsten Methoden, um solche Messungen durchzuführen. Es erfordert besondere Vorsichtsmaßnahmen und Genehmigungen, da radioaktive Substanzen verwendet werden.

Im Gegensatz dazu ist ein immunoradiometrischer Assay (IRMA) ein Immunoassay, der radioaktiv markierte Moleküle verwendet, jedoch nicht unmittelbar, sondern unmittelbar.

Ein Radioallergosorbens-Test (RAST) ist ein Beispiel für einen Radioimmunoassay. Es wird verwendet, um das verursachende Allergen für eine Allergie zu erkennen .

Methode

Classically, einen Radioimmunoassay, eine bekannte Menge eines auszuführen Antigen wird radioaktive , häufig durch Markierung mit gamma-radioaktiven Isotopen von Iod , wie etwa 125-I , gebunden an Tyrosin . Dieses radioaktiv markierte Antigen wird dann mit einer bekannten Menge an Antikörper für dieses Antigen gemischt , und als Ergebnis binden die beiden spezifisch aneinander. Dann wird eine Serumprobe eines Patienten hinzugefügt, die eine unbekannte Menge desselben Antigens enthält. Dies bewirkt, dass das nicht markierte (oder "kalte") Antigen aus dem Serum mit dem radioaktiv markierten Antigen ("heiß") um Antikörperbindungsstellen konkurriert. Wenn die Konzentration an "kaltem" Antigen erhöht wird, bindet mehr davon an den Antikörper, verdrängt die radioaktiv markierte Variante und verringert das Verhältnis von antikörpergebundenem radioaktiv markiertem Antigen zu frei radioaktiv markiertem Antigen. Die gebundenen Antigene werden dann getrennt und die Radioaktivität des im Überstand verbleibenden freien (ungebundenen) Antigens wird unter Verwendung eines Gammazählers gemessen .

Diese Methode kann im Prinzip für jedes biologische Molekül verwendet werden und ist weder auf Serumantigene beschränkt, noch ist es erforderlich, die indirekte Methode zur Messung des freien Antigens anstelle der direkten Messung des eingefangenen Antigens zu verwenden. Wenn es beispielsweise unerwünscht oder nicht möglich ist, das interessierende Antigen oder Zielmolekül radioaktiv zu markieren, kann eine RIA durchgeführt werden, wenn zwei verschiedene Antikörper verfügbar sind, die das Ziel erkennen, und das Ziel groß genug ist (z. B. ein Protein), um mehrere zu präsentieren Epitope zu den Antikörpern. Ein Antikörper würde wie oben radioaktiv markiert sein, während der andere unverändert bleiben würde. Die RIA würde damit beginnen, dass der "kalte" unmarkierte Antikörper in Lösung interagieren und an das Zielmolekül binden kann. Vorzugsweise wird dieser unmarkierte Antikörper auf irgendeine Weise immobilisiert, beispielsweise gekoppelt an eine Agarosekügelchen , beschichtet auf eine Oberfläche usw. Als nächstes kann der "heiße" radioaktiv markierte Antikörper mit dem ersten Antikörper-Zielmolekül-Komplex interagieren. Nach ausgiebigem Waschen wird die direkte Menge an gebundenem radioaktivem Antikörper gemessen und die Menge an Zielmolekül quantifiziert, indem es mit einer gleichzeitig getesteten Referenzmenge verglichen wird. Diese Methode ähnelt im Prinzip der nicht radioaktiven Sandwich- ELISA- Methode.

Geschichte

Diese Methode wurde von Solomon Berson und Rosalyn Sussman Yalow am Veterans Administration Hospital in der Bronx , New York, entwickelt. Diese revolutionäre Entwicklung brachte Dr. Yalow 1977 den Nobelpreis für Medizin ein, die zweite Frau, die ihn jemals gewann. In ihrer Dankesrede sagte Dr. Yalow: "Die Welt kann es sich nicht leisten, die Talente der Hälfte ihrer Bevölkerung zu verlieren, wenn wir die vielen Probleme lösen wollen, die uns beschäftigen." Yalow teilte den Nobelpreis mit Roger Guillemin und Andrew Schally , die den Preis aufgrund ihrer Forschungen zur "Peptidhormonproduktion des Gehirns" erhielten.

Verweise

Schritte in der Radioimmunoassay- Technik

Externe Links